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et 용액을 1~2방울 가한뒤 3분간 방치한후 염색약을 버리고 물로 씻는다 (washing 세척)
(6) 95% ethyl alcohol로 30초 동안 탈색후 물로 씻는다. 탈색 과정이 매우 중요한 과정이므로 주의해야 한다
(8) Safranin으로 30초간 대조 염색한 후 물로 씻는다
(9)
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염색하는 방법 중 가장 잘 알려진 그람 염색(Gramstaining) 방법은 crystal violet, iodine, ethanol과 safranine을 이용한 감별 염색법이다. 기본적으로 세균은 염색이 되는 패턴에 따라 구분할 수 있다. 이 중 그람 염색법(Gram stain)은 임상에서 가장 흔하게
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염색법인 그람염색법을 이해하고 직접 염색과정을 익히는 것이다.
세균의 염색과정에서 화염 고정, 알코올 탈색과 safranin으로의 그람음성균 염색을 생략한 부분적인 그람염색 실험이었지만 crystal violet만으로도 준비된 세균을 충분히 관찰
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흐르게 해준다.
ⅷ) smear를 건조, 즉 알맞게 말린다. 이 때 닦아서 말리면 안 된다.
ⅸ) 현미경으로 슬라이드를 관찰한다.
5. Observation
ⅰ) Crystal violet을 60초 정도 반응시킬 때 보라색으로 염색되는 것을 관찰할 수 있었다.
ⅱ) 그람 iodine을 반응
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Crystal violet을 떨어뜨려 1분간 염색 후 세척하고, Gram's iodine을 떨어뜨려 또 1분간 고정한 후 세척한다. 그리고 나서 탈색제로 탈색을 실시하게 된다. 탈색의 과정은 이번 실험에서 중요한 부분을 차지하였는데 그람 양성균은 탈색제로 탈색하여
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