ye를 2ul 넣어야 하는데 total volume이 12ul이 넘어버리므로 18ul로 해준다.
4. comb을 넣을 때는 거품이 생기지 않게 기울여서 넣는다.
5. 파란색 dye가 밑에 올때까지 전기영동 하는데 너무 끝에까지 닿지는 않게 한다. 단백질이 빠져버리기 때문이다.
6. 전기영동 중 에러가 나면 stop 누르고 run 누른다. (거품 올라오는걸 확인한다.) 유리판의 반절정도 왔을때 stop하는게 좋다.
7. 스펀지는 transfer buffer에 적셔서 안에있는 공기가 빠지도록 넣다 뺐다 한다. 3MM 페이퍼도 transfer buffer에 적신다.
8. 메탄올로 적신 membrane paper는 오른쪽 위에 앞인지 뒤인지 marker 한다.
9. 젤위에 NC종이를 올리고 공기가 안들어가게 덮는다.
10. transfer 할때 뚜껑을 덮고 까만색(-)가 까만색 뚜껑쪽으로 오도록 해준다. 이때 유리판은 깨지지 않도록 조심한다.
11. 열이 많이 나서 열이 많이 나지 않도록 얼음팩을 넣는다.
12. actin은 1:1000dmfh 희석한다. (보통 단백질은 1:1000)
13. 암실에서는 핸드폰 불빛을 키지 않도록 한다.
실험결과
◆ actin 단백질
고찰
단백질이 안나올수 있는 이유는 1.해당 단백질이 안들어있다, 2. 2차 antibody가 충분하지 않았다 의 이유인데 이번 실험에서는 우리조가 쓰는 actin 단백질은 기본이 되는 단백질이어서 잘 나온다고 했었고 2차 antibody도 충분했던 것 같다.
이렇게 단백질이 정확하게 나왔다는 것은 actin 단백질을 정확하게 정량했다는 뜻이다.